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转基因猪的技术--体细胞核移植法
2009-10-12 阅读: 作者:admin 编辑:admin

    1997年英国Roshilin研究所Wilmut等成功地克隆出世界首例体细胞核移植的后代,为转基因动物提供了新方法。Park等用转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的成纤维细胞和耳上皮细胞作核供体,获得了转基因仔猪。Mayuko等首先采用单精注射技术得到的转人的血白蛋白基因(hALB)和绿色荧光蛋白(EGFP)转基因猪,然后取转基因猪的肾、肺和肌肉细胞,血清饥饿法诱导至静止期;将其作为核供体移入去核的卵母细胞构建重构胚;将767枚重构胚移入5头受体,产下6只转基因的克隆仔猪。Lai等(2006)报道,将pCAGGS-hfat-l转染到原代培养的猪胎儿成纤维细胞中,经250μg.mL-1G418筛选后,作为核供体进行体细胞核移植,总供将1633牧重构胚移入14头受体,生出12头仔猪,PCR检测表明有6头阳性。Watanabe等分离妊娠73d猪胎儿的体细胞,用电穿孔法将带有EGFP和pac基因的载体转入体细胞,然后用低浓度的博罗霉素(2μg.mL-1)筛选转染细胞;用筛选后的转染细胞作为核供体进行体细胞核移植,得到的重构胚移入14头受体的输卵管,4头受孕并产下9头小猪,其中8头出生后不久死亡,

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