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转基因猪的技术--精子介导法
2009-10-12 阅读: 作者:admin 编辑:admin

    第1例报道用精了介导法获得转基因动物的是Lavitrano等,他们将外源基因与小鼠的精子共孵育,获得高达30%的转基因小鼠。这之后不久,Gandolfi  和Lavitrano等报道用同样的力法获得了转基因猪.他们将新鲜的猪精液离心洗涤去精清,然后与CAT(乙酰转移酶)基因共培养,再手术输入母猪的子宫角,出生的后代中21%整合了外源基因。这种方法立即引起各国同行的广泛关注。显而易见,原核注射法需要昂贵的设备、高难度的操作和较大的耗费,而精子介导法则使动物转基因技术变得简便和廉价。然而之后的几年有些实验室却未能重复出上述的结果,由此引发了对这一方法可信度的争议。问题的关键在于,精子在与外源DNA共培养的情况下,能否互相结合,或者说精子有无携带外源DNA的能力。到20世记90年中期,世界上许多实验室的研究结果都证实了精子结合DNA的能力在各种动物中普遍存在。我国陈永福等(1990)通过电镜观察,精子与DNA共育后,确认外源DNA确实进入了精子内部,当精子出现顶体反应后,进入的机率加大。Cheng Teng Kuei等人(1995)也证实,已获能的猪精子与DNA共培养(37℃,60min)后,有40.8%~79.8%的精子与DNA结合。经过近20年的研究,人们已不再争议这种转基因方法的可行性,对陔转基因体系也进行了诸多的改进,出现了一些新的方法。归纳起来,有体外转染和体内转染两大类。①体外转染:即是将采集的精子在体外处理,使之与DNA相结合,然后再采用人工授精、输卵管输精、体外受精或胞质内精子注射(ICSI)的方法获得转基因动物。体外转染可有外源精子与DNA直接孵育法、脂质体包埋法和电穿孔导人法等。②体内转染:即是将外源 DNA直接注射到动物的输精管或曲细精管内、使其在动物的体内与外源         DNA相结合,从而获得转基因动物。体内转染有输精管注射和曲细精管注射两种途径。湖北省农业科学院畜牧兽医研究所肖红卫等首先用脂质体包埋CD59基因,然后通过输卵管输精和睾丸曲细精管注射,均获得了转基因猪。

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