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转基因猪的技术--原核注射法
2009-10-12 阅读: 作者:admin 编辑:admin

    最早建立的转基因猪技术是参照小鼠的原核注射法。但有些动物的受精卵(如猪)看不到原核,这就必须有一种技术使原核显现出来。WAll等(1985)对猪受精卵进行离心处理,使卵黄颗粒沉降到卵的一侧,便可将原核显现出来。之后人们便延用了这种离心的办法,对猪的受精卵进行原核注射。对注射基因的受精卵,最开始是按照动物胚胎移植的常规程序,移植到与供体同步发情的母猪输卵管内,这就需要同时制备大批同步发情的母猪。魏庆信等将注射基因的受精卵直接移入提供受精卵的母猪输卵管内,使供、受体猪为一体,称之为“自体移植”,不仅节省了受体母猪及其同步发情的处理过程,而且由于规避了供、受体发情同步化的误差,也提高了母猪移植的受孕率,提高了效率,降低了成本,使复杂繁琐的过程变得相对简便。魏庆信等还证实了线性DNA片段比环状DNA整合效率要高,因此在显微注射前需将表达质粒线性化。Kubisch等(1995)尝试用体外培养成熟的卵经过体外受精来获得原核胚,然后用显微注射生产转基因胚胎。然而由于猪卵母细胞体外受精的效率较低,他们并没有用这种力法培育出转基因猪;而且从屠宰场获得的卵母细胞系谱不清,也无法应用于以育种为目的的转基因猪生产。

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